Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型心血管疾病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现成来肝细胞内自身抗基底到显现成来1M-心血管疾病诊疗病征的十分困难率在老年人时期就有很好的阐述，多个肝细胞内自身抗基底前提特征性的老年人当中有70%在血清转换后10周内患上心血管疾病，而随访15年的老年人这一比重减少到84%。来得之下，占诊疗1M-心血管疾病一半以上的M-1M-心血管疾病的复发机制还没有得不到更好的深入研究。

越来越多的人开始可用已确定该系统来定义1M-心血管疾病的十分困难：个基底在显现成来多种肝细胞内自身抗基底时进到第1期当中，显现成来血糖异常时进到第2期当中，显现成来病征时进到第3期当中。一些多发肝细胞内自身抗基底前提特征性的个基底，在1期和2期，十分困难较慢，并发展为复发的1M-心血管疾病。我们之前阐述了一第三组在首次探测到多种肝细胞内自身抗基底采样后多于10年无心血管疾病的不够慢十分困难者，这第三组病征人口数少，但前提特征非常明确。随后，我们发现肝细胞内自身淋巴细胞甲基化CD8+T细胞内自由基在十分困难比较慢的病征当中前提不假定，但在近期复发和一直假定的心血管疾病病征当中很容易探测到。这有可能得出结论，与十分困难病征来得，这些病征自身病原体的闭环增强。

早期深入研究得出结论，尽管闭环性T细胞内(Treg)生产量长时间，但心血管疾病病征假定一些基本功能缺陷，其当中有数对IL-2的自由基能够增大。此外，心血管疾病病征当中的畸变CD4+T细胞内有可能对闭环不够具抵抗性，乏善可陈为畸变T细胞内的抑止西移动，自然归因于的Treg和基底外归因于的作用于Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T细胞内当中IL-2自由基西移动。本深入研究的目的是阐述了CD4+闭环性T细胞内(Treg)在一小群极比较慢十分困难者当中的前提特征，他们的平均成年为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以人群为基础的侧向深入研究，在21岁一般而言胃癌的病征亲属当中检查1M-心血管疾病的危险诱因。我们之前阐述了一直比较慢十分困难者的前提特征，他们保证多重肝细胞内自身抗基底前提特征性超过10年，但没有显现成来心血管疾病的诊疗病征，慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保证无心血管疾病并愿意提供大量肾脏采样的比较慢十分困难者纳入T和B细胞内基本功能深入研究。在现有的深入研究当中，8名慢十分困难者(SP第三组)，当中位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的肝细胞内自身抗基底前提特征性。所有的与会者都处于1M-心血管疾病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞内自身抗基底对某些淋巴细胞的前提特征性自由基，然而，一名病征已经处于2期多于6年，但没有显现成来诊疗病征，一名病征被诊断为心血管疾病，该病人72岁，在采集实验采样时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在的测试当中对该供基底展开了单独评量。分离外周血单个核细胞内(PBMCs)，采行多表述式流式细胞内练成和T细胞内抑止实验评量供基底当中Treg的增益、环境诱因和基本功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和复归)展开无监督聚类深入研究，评量Treg环境诱因。

结果：与保健供基底来得，来自慢十分困难基底的知觉CD4+T细胞内的监督聚类标示成，激能活的知觉CD4+ Treg增益减少，与阿托品作用于的TNFR相关酶(GITR)表述减少有关。一名HbA1c上升时的病征与十分困难比较慢者和也就是说的对照第三组来得，Treg谱有所相同。基本功能深入研究得出结论，与保健供基底来得，来自比较慢十分困难基底的Treg介导的CD4+畸变T细胞内抑止明显损毁。乏善可陈为对畸变CD4+T细胞内CD25和CD134表述的抑止减少。

三幅1 深入的环境诱因深入研究标示成，CD4+Treg亚M-在慢十分困难描述符当中减少。由FlowSOM转化的Treg室，涌进在来自所有供基底的能活CD4+CD45RA -细胞内上。根据上标物表述鉴定成10个元簇:知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)可用9个相同Treg上标转化的10个元簇的MST。每个键值象征性一个战斗群(100个战斗群)，不够大的元战斗群(10个元战斗群)在键值第三组周遭手工。每个键值当中的糕三幅坚称单个上标的表述层次。(b)每个元聚类的热三幅，以标示成整基底上标表述。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化三幅，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)来得之下同位素为每个metacluster箱支线三幅(同位素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞内(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞内(l)。深蓝色红色象征性人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 可用CITRUS的预测模M-确认，Treg增益的减少是十分困难比较慢的徽章。分级门控(a - f)和果树深入研究(g-k)比较SP与会者和也就是说的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞内上的关联性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的象征性性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR表述展开分离，精心设计FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第三组以及供基底SP 606(深蓝色)当中CD25+ cd127的增益核心内容三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的箱支线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)果树簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，圆圈突成的簇被标识为SP和HD描述符彼此之间的相同。(j)箱支线三幅标示成了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组当中，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的来得之下同位素(比重)。(k)直方三幅标示成每个簇的环境诱因(粉红色)和Treg上标来得之下表述与氛围表述(浅蓝色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。氛围与所有其他簇当中上标的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定

三幅3 与保健献血者来得，十分困难比较慢者知觉treg的GITR减少。每个知觉CD4+T细胞内元簇(知觉T细胞内_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞内;HLA-DR + GITR +知觉T细胞内;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个表述上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的表述热三幅(sp606不有数在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇当中所有HD(紫色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表述相联，标示成直方三幅(c)和核心内容三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和鉴定，p< 0.07(深蓝色)所有供基底有数，p< 0.05(浅蓝色)供基底SP 606和也就是说的HD不有数在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表述，从分级门控，从所有HD(紫色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深蓝色)相联，标示成直方三幅(e)和核心内容三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩鉴定

三幅4 来自比较慢十分困难的CD4+ treg细胞内控制畸变CD4+T细胞内的能够增大。SP第三组用浅蓝色的支线和红色坚称，HD第三组用白色的支线和红色坚称，深蓝色的支线/红色坚称供基底sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被上标为CFSE, Treg按注意到的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞内，培育成3天内展开流式细胞内练成探测。(a-d)与CD4+反之亦然者来得之下应的treg培育成(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培育成。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE抑止倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止倍数。可用前提特征性对照(激能活的响应细胞内分别为treg)计算抑止倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 畸变CD4+T细胞内对比较慢十分困难的T细胞内再生的抑止不够恰当。SP第三组用浅蓝色的支线和红色坚称，HD第三组用白色的支线和红色坚称，深蓝色的支线/红色坚称供基底sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel上标，treg按注意到的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞内，培育成3天内展开流式细胞内练成(CD25反染)和细胞内因叔父深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者联合培育成。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE抑止倍数(b)。(c,d) CD25抑止倍数(c)和CD134抑止倍数(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育成当中的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得成的推论是，来自比较慢十分困难叔父的再生知觉CD4+Treg在GITR表述当中得不到了扩展和丰富多彩，忽视了进一步深入研究Treg在1M-心血管疾病风险个基底当中的异质性的必要性。

原文成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28