Diabetologia：酪氨酸但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到肝细胞自身免疫自由基将到用到1标准型冠心病临床研究副作用的的发展亲率在青不算年时期就有不太好的详细描述，多个肝细胞自身免疫自由基将乙型肝炎的青不算年中所有70%在血清转换后10年内患上冠心病，而随访15年的青不算年这一分之一提高到84%。相比之下，占去临床研究1标准型冠心病一半以上的标准型1标准型冠心病的复发机制还没赢取前提的研究成果。

日益多的人开始适用分前期系统设计来概念1标准型冠心病的的发展：个体在用到多种肝细胞自身免疫自由基将时进入第1前期，用到血糖异常时进入第2前期，用到副作用时进入第3前期。一些多发肝细胞自身免疫自由基将乙型肝炎的个体，在1期和2期，的发展很慢，并发展为复发的1标准型冠心病。我们以后详细描述了一都由在首次探测到多种肝细胞自身免疫自由基将抽样后至不算10年无冠心病的亦然慢的发展者，这都由病患者人数不算，但相似性非常确切。随后，我们发现肝细胞自身淋巴细胞酪氨酸CD8+T细胞会自由基将在的发展比很慢的病患者中所基本不依赖于，但在早先复发和近十年依赖于的冠心病病患者中所很更为易探测到。这也许表明，与的发展病患者相比，这些病患者自身免疫自由基将的闭环减慢。

以前研究成果表明，尽管闭环性T细胞会(Treg)数量长时间，但冠心病病患者依赖于一些机制缺失，其中所最主要对IL-2的自由基将意志力减缓。此外，冠心病病患者中所的震荡将CD4+T细胞会也许对闭环更为具抵抗性，表现为震荡将T细胞会的抑止减弱，自然归因于的Treg和体外归因于的抑止Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T细胞会中所IL-2自由基将减弱。本研究成果的目标是详细描述了CD4+闭环性T细胞会(Treg)在一小群亦然比很慢的发展者中所的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的平行研究成果，在21岁表列出出院的病患者亲属中所检查1标准型冠心病的危险因素。我们以后详细描述了近十年比很慢的发展者的相似性，他们保持稳定多重肝细胞自身免疫自由基将乙型肝炎超过10年，但没用到冠心病的临床研究副作用，慢性或非来进行性自身免疫。随后，10名一直保持稳定无冠心病并愿意提供大量体液抽样的比很慢的发展者纳入T和B细胞会机制数据分析。在现在的研究成果中所，8名慢的发展者(SP都由)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的肝细胞自身免疫自由基将乙型肝炎。所有的参与者都处于1标准型冠心病的发展的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身免疫自由基将对某些淋巴细胞的乙型肝炎自由基将，然而，一名病患者已经处于2期至不算6年，但没用到临床研究副作用，一名病患者被病患为冠心病，该受试者72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在建模中所对该小分子来进行了单独检验。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，转用多参数流式细胞会法术和T细胞会抑止试验车检验小分子中所Treg的频带、表标准型和机制。适用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、举例来说和重回)来进行无监督聚类数据分析，检验Treg表标准型。

结果：与肥胖症小分子相比，来自慢的发展体的失忆CD4+T细胞会的监督聚类说明了，抑制的失忆CD4+ Treg频带提高，与止痛药抑止的TNFR相关蛋白(GITR)表述提高有关。一名HbA1c急剧下降的病患者与的发展比很慢者和给定的对照都由相比，Treg谱相同。机制数据分析表明，与肥胖症小分子相比，来自比很慢的发展体的Treg抑制的CD4+震荡将T细胞会抑止值得注意受到破坏。表现为对震荡将CD4+T细胞会CD25和CD134表述的抑止提高。

平面图1 深入的表标准型数据分析说明了，CD4+Treg亚标准型在慢的发展字段中所提高。由FlowSOM生成的Treg三楼，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据记号物表述断定出10个元簇:失忆T细胞会_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞会;HLA-DR + GITR +失忆T细胞会;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)适用9个不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个键值推选一个一个大(100个一个大)，更为大的元一个大(10个元一个大)在键值都由周围手绘。每个键值中所的饼平面图暗示单个记号的表述层级。(b)每个元聚类的热平面图，以说明了整体而言记号表述。(c, d)为HD都由(c)和SP都由(d)生成平面图，以及FlowSOM识别系统设计的每个元簇的很薄。(e-l)一般来说总质量为每个metacluster箱直通平面图(总质量> 0.05%)断定为HD和SP都由:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞会(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞会(l)。深蓝色边框推选捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩检测。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 适用CITRUS的预测模标准型猜测，Treg频带的提高是的发展比很慢的徽标。分级奈斯(a - f)和大豆数据分析(g-k)比较SP参与者和给定的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞会上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团体的推选性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR表述来进行分离，模拟FlowSOM小团体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)都由以及小分子SP 606(深蓝色)中所CD25+ cd127的频带综合平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯闭包的箱直通平面图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述风力着色，箭头醒目标簇被识别系统设计为SP和HD字段两者之间的不同。(j)箱直通平面图说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)都由中所，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的一般来说总质量(分之一)。(k)直方平面图说明了每个簇的表标准型(粉红色)和Treg记号一般来说表述与氛围表述(蓝色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。氛围与所有其他簇中所记号的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩检测

平面图3 与肥胖症献血者相比，的发展比很慢者失忆treg的GITR提高。每个失忆CD4+T细胞会元簇(失忆T细胞会_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞会;HLA-DR + GITR +失忆T细胞会;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个表述记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的表述热平面图(sp606不最主要在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表述接在，说明了直方平面图(c)和综合平面图(d)。Wilcoxon配对大写字母秩和检测，p< 0.07(深蓝色)所有小分子最主要，p< 0.05(蓝色)小分子SP 606和给定的HD不最主要在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR表述，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)接在，说明了直方平面图(e)和综合平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写字母秩检测

平面图4 来自比很慢的发展的CD4+ treg细胞会高度集中震荡将CD4+T细胞会的意志力减缓。SP都由用蓝色的直通和边框暗示，HD都由用灰色的直通和边框暗示，深蓝色的直通/边框暗示小分子sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会来进行分选。CD4+CD25−(转发者)被记号为CFSE, Treg按掩蔽的分之一溶液。用抗CD3 /28微珠再生细胞会，人才3当晚来进行流式细胞会法术探测。(a-d)与CD4+转发者一般来说应将的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止总和。适用乙型肝炎对照(抑制的鼓动将细胞会不含treg)测算抑止总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 震荡将CD4+T细胞会对比很慢的发展的T细胞会再生的抑止更为敏感。SP都由用蓝色的直通和边框暗示，HD都由用灰色的直通和边框暗示，深蓝色的直通/边框暗示小分子sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会来进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel记号，treg按掩蔽的分之一溶液。用抗CD3 /28微珠再生细胞会，人才3当晚来进行流式细胞会法术(CD25反染)和细胞会因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止百分亲率(b)。(c,d) CD25抑止百分亲率(c)和CD134抑止百分亲率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中所的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自比很慢的发展子的再生失忆CD4+Treg在GITR表述中所赢取了构建和独特，凸显了进一步研究成果Treg在1标准型冠心病安全性个体中所的异质性的重要性。

出处说是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28